Autolyse av bakegjær for isolerting av gjærenzymer
Autolyse av bakegjær i et laboratorium hvor først frisk bakegjær puttes i en fryseboks -21oC slik at gjærcellene dør og blir ødelagt. Deretter setter man løsningen kaldt 1-2 døgn under omrøring, og holder kontroll på pH ved stadig å tilsette en base. Autolysen gjør at gjærløsningen blir sur. Etter sentrifugering har man en gulfarget løsning som inneholder mange stoffer og enzymer fra gjæren. Enzymene kan deretter isoleres ved fraksjonert felling av protein med konsentrert ammoniumsulfat, som en start for videre rensing av enzymene via søylekromatografi hvor proteiner blir fraksjonert etter størrelse (Sephade- G100, Sephadex G-200), ionebytterkromatografi hvor enzymene festes på kolonner med en anionbytter eller kationbytter, eller eller kolonner til affinitetskromatografi, og andre metoder for rensing og oppkonsentrering av enzymer. Deretter kan enzymreaksjonene studeres mer i detalj ved tilsetning av substratetene i bestemte konsentrasjoner til enzmene i såkalte enzymessay ved en fast pH og temperaturhvor man måler hvor mye produkt som dannes i enzymreaksjonen per proteinmengde. Brukt bl.a. i undertegnedes cand.real.-oppgave i 1972-1974for å lage C14-radioaktive substrater i enzymreaksjoner, og som man ikke kunne få kjøpt,
Litteratur
Wikipedia