Brukt til å identifiser koliforme fakultativt anaerobe bakterier
I for indol, M for metylrødt, V for Voges-Proskauertest, iC i citrattest.
Man lar bakterien man skal undersøke vokse opp på pepton vannagar tilsatt aminosyren tryptofan.
M (metylrødt): Test om bakteriene produserer nok syre til å senke pH under 4.3 pH-indikatoren metylrødt er ved pH 4.2 (rød) og pH 6.7 (gul). E.coli gir rød farge, A. aerogenes, Klebsiella og Enterobacter gir gul.
V: Voges-Proskauer test. Test om det lages acetoin ved fermentering av sukker. Acetoin reagerer med alfa-naftol. iC: citrat. Undersøker om organismen kan vokse i citrat. E. coli kan ikke dette. En vanlig brukt test for koliforme bakterier er først membranfiltrering. Membranfilteret legges på en eosin-metylenblått (EMB) agar med laktose og sukrose som virker selektivt på bakterier som fermenterer laktose. Mørk farge indikerer koliforme bakterier. Metylenblått hemmer vekst av Gram-positive bakterier.
Indoltest
Hvis bakterien inneholder enzymet tryptofanase blir tryptofan nedbrutt til indol, pyruvat og ammonium. Indol kan bli ekstrahert ut med xylen. Innhold av indol undersøkes med Kovacs reagens (amylalkohol og para-dimetylaminobenzaldehyd og konsentrert saltsyre) som gir rød/rosa farge hvis indol tilstede. Både Eschericchia coli og Proteus vulgaris kan omdanne tryptofan til indol.
Bakterieløsningen deles i to en for metylrødt test og en for Voges-Proskauertest.
Metylrødttest
Metylrødttesten gir rød farge hvis det blir produsert syrer ved blandet syre fermentering. Hvis løsningen er gul >pH6.1 er det i stedet butandiolfermentering.Bakterier som produserer syrer ved blandet fermentering er Escherichia coli, Shigella, Salmonella, Proteus, Citrobacter.
Voges-Proskauertest.
Alfa-naftol og kalilut (KOH) for test om acetoin (acetylmetylkarbinol) er tilstede.
Blandingen rystes kraftig og gir rødrosafrage hvis det er butandiolfermentering.
Citrattest
Citrattest (sitrattest) viser som bakteriene kan bruke citrat (anionet til sitronsyre) som eneste karbonkilde . Bruker Simmons citratagar som inneholder citrat som C-kilde og ammonium som N-kilde, med bromtymolblått som indikator. Agaren er grønnfarget før inokulering av bakteriene og fargeindikatoren blir blå hvis bakteriene kan vokse på citrat. Salmonella, Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter og Proteus marabilis kan bruke citrat som karbonkilde.
Litteratur
Wikipedia